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          大小鼠新物體識別實驗注意事項,溫故而知新!
          點擊次數:43 發布時間:2022-05-18

          物體識別實驗(ORT)是一種常用的行為測定法,用于研究小鼠學習和記憶的各個方面。ORT相當簡單,可以在3天內完成:適應日、訓練日和測試日。在訓練過程中,允許小鼠探索兩個相同的物體。在測試日,其中一個物體被替換為一個新物體。因為老鼠天生對新奇事物有偏好,如果老鼠識別出熟悉的物體,它會把大部分時間花在新奇的物體上。由于這種與生俱來的偏好,不需要積極或消極的強化或長時間的訓練計劃。


          此外,ORT也可以針對多種應用進行修改??梢钥s短保留間隔時間來檢查短期記憶,也可以延長保留間隔時間來探查長期記憶??梢栽谟柧毲?、訓練后或回憶前的不同時間使用藥物干預來研究學習的不同階段(即獲得、早期或晚期鞏固或回憶)??傮w而言,ORT是一種相對低壓力、有效的小鼠記憶測試,適用于檢測藥理學、生物學或遺傳學操作后的神經心理變化。

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          實驗介紹




          物體識別試驗(ORT)又稱新型物體識別試驗(NOR),是檢測小鼠學習記憶不同階段的一種相對快速有效的手段。最初由Ennaceur和Delacour在1988年描述,主要用于大鼠。然而,從那時起,它已成功地適用于小鼠。該測試只依賴于三個階段:一個習慣化階段,一個培訓階段和一個測試階段。訓練僅僅涉及對兩個相同物體的視覺探索,而測試階段則涉及用一個新的物體替換先前探索過的物體。因為嚙齒動物有一種天生的對新奇事物的偏好,一只記得熟悉的物體的嚙齒動物會花更多的時間探索新奇的物體。


          與其他嚙齒動物記憶測試相比,ORT的主要優勢在于它依靠嚙齒動物的自然傾向來探索新奇事物。因此,不需要大量的培訓課程或任何積極或消極的強化來激勵行為。這意味著相對于其他測試,ORT的壓力要小得多,并且比其他常用的記憶測試(如Morris水迷宮或Barnes迷宮)需要的運行時間短得多,這兩種測試都需要一周或更長時間。因此,口服體液補充療法的條件與研究人類認知所用的條件更相似,這增加了該試驗相對于許多其他嚙齒動物記憶試驗的生態有效性。


          同樣,由于ORT是一項簡單的視覺回憶任務,因此它已成功地適用于包括人類和非人靈長類在內的許多物種,以評估陳述性記憶的不同種間方面。最后,可以很容易地修改ORT,以檢查學習和記憶的不同階段(即獲得、鞏固或回憶),評估不同類型的記憶(如空間記憶),或評估不同的記憶保持間隔(即短期記憶與長期記憶)。

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          實驗揭秘


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          如何選擇合適的物體?



          • 選擇不同的物體,以便于動物識別,但具有相似的復雜程度(紋理、形狀、顏色模式和亮度等)。有效地減少任何可能影響結果的潛在誘發的物體偏好。 

          • 使用與老鼠大小接近或稍大一點的物體來鼓勵探索(圖1)。為了減少誘發的偏好,確保小鼠能夠在兩個物體上或兩個物體都不能攀登,盡管攀登物體的能力可能會增加探索的興趣(僅僅坐在物體上的時間不計入探索時間)。

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          • 每個物體至少有2個相同的。為了在測試過程中最大限度地減少潛在的氣味線索,事實上每個物體建議要有3個,一個用于訓練,一個用于測試,一個用于更換除味。

          • 使用由不易碎材料制成的物體,因為在實驗過程中由于損壞而丟失物體可能會干擾測試的連續性,并可能對動物造成傷害或傷害。

          • 在使用前和使用之間徹底清潔物體。



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          實驗光線



          為了盡量減少明亮照明的壓力,請使用漫反射、低照明,迷宮中心的照明度約為 20 勒克斯。使用類似于常規住房條件的溫度和濕度。如果將老鼠從一個房間搬到另一個房間進行實驗,請在每天使用前讓老鼠適應新房間至少 1 小時。



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          實驗預處理



          在訓練前將老鼠處理好。由于該試驗依賴于嚙齒動物探索新奇事物的自然傾向,因此可減少處理過程中可能會干擾其探索競技場以及隨后探索物體的區域的任何壓力或焦慮。理想情況下,每天處理小鼠1 - 2次,至少1分鐘,試驗前1-2周。



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          實驗步驟



          • 在訓練日,在對角線上放置 2 個相同的物體(一個在 NW 角,一個在 SE 角)。如果物體太輕并且可以被老鼠移動,需要將它們固定在地板上。

          • 在測試日,使用每個物體的第三個副本,將一個熟悉的物體和一個新奇的物體放置在與訓練日相同的對角線上(圖2)。


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          Tip:對于實驗測試,使用由白色或黑色無孔塑料制成的方形室(約40 cm x 40 cm x 40 cm),與小鼠顏色形成對比。或者,使用圓形開放場平衡每組物體的使用,這樣每一個物體都可以作為一個熟悉的物體和一個新奇的物體使用。此外,平衡新物體的位置到競技場的4個角落。確保記錄哪只對角線用于哪只動物,以便訓練日使用的對角線與測試日每只小鼠使用的對角線相同。


          • 將相機直接放在設備的上方,以獲得最佳的探索視野??墒褂镁哂斜屈c檢測功能的VisuTrack軟件進行準確分析。如果使用軟件,請在開始之前捕獲已放置對象的背景圖像。在軟件中,將探索區域設置為對象周圍大約 2-3 cm。

          • 在實驗過程中,請確保實驗者距離實驗箱1米以上,并且老鼠不可見。注意:任何時候老鼠坐在物體上而沒有主動的觸須掃描或嗅探都不算作探索時間。



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          數據分析



          • 在訓練(T1)和測試(T2)期間,計算每個會話中兩個對象的總探索時間(e1和e2)。大多數小鼠應在5分鐘前達到兩個物體20秒的最小探測總數。

          • 對于探索性低且不符合此標準的小鼠品系,將T1和T2時間延長至10 min,延長5 min,如試點測試期間所觀察到的。 

          • 對行為評分5分鐘或超過5分鐘,直至達到20秒的標準。 

          • 如果小鼠在10分鐘內對T1或T2兩個物體的探索未達到20秒的最小值,則排除在分析之外,因為無法確認它們是否花費了足夠的探索時間來學習/辨別。





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