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          還在為小鼠懸尾實驗結果“頭疼”嗎?測試過程中這些細節您注意了嗎?
          點擊次數:49 發布時間:2022-05-11

          小鼠懸尾測試可用于篩選潛在的抗抑郁藥物,并評估預期會影響抑郁相關行為的操作。測試時,用膠帶將老鼠的尾巴懸掛起來,使其無法逃脫或抓住附近的物體。整個測試期通常持續時間為6分鐘。懸尾實驗是藥物發現中一種有價值的工具,可用于高通量篩選潛在的抗抑郁化合物。今天,我們將和大家一起了解懸尾實驗測試過程中的細節,并特別強調可能發生的潛在問題以及如何避免這些問題。

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          懸尾箱



          懸尾實驗箱通常有塑料制成,尺寸通常為高55cm*寬60cm*深11.5cm,為了防止動物相關觀察或互動,實驗箱中間有擋板將小鼠隔開來,同時保證每只小鼠的隔間足夠寬敞,小鼠不能觸碰到墻壁,每個隔間大小建議不低于這個尺寸:高55cm*寬15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子與實驗箱地板之間的大致距離建議為 20-25 cm。

          每個隔間頂部裝有一個鋁制吊桿,用于懸掛小鼠的尾巴。需要注意,如果使用大型遠交小鼠品系(例如 CD-1),則需要相應增加尾部懸吊箱的各個隔室的大小。在每個隔間的底部,放置一個可拆卸移動的鋁制托盤,用于收集動物的糞便或尿液。


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          膠帶



          膠帶是我們日常生活中比較常見的工具,但是在懸尾測試中膠帶的選擇是至關重要的。膠帶應牢固地粘在小鼠的尾部和吊桿上,并且強度足以承受被測小鼠的重量。同時,膠帶也不應該太粘,因為我們會在每個測試結束后取下動物,避免給動物帶來疼痛應激。這里,我們建議選擇醫用膠帶,動物的尾巴皮質比較接近于人的皮膚。另外,膠帶在每個小鼠尾巴粘貼的位置也要注意,盡量保持統一。


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          懸尾分析軟件



          懸尾分析軟件的核心算法選擇也很重要,與曠場實驗等測試不同,懸尾測試不應該追蹤動物的質心/重心。VisuTrack動物行為分析軟件(上海欣軟)通過考察小鼠四肢的真實運動情況,實時分析小鼠搖擺不動(絕望狀態)、掙扎行為等指標,自動存儲原始實驗視頻。


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          白噪聲發生器(可選)



          噪聲發生器可以掩蓋間歇性或者突發的環境聲音。特別推薦在實驗室環境中使用噪音發生器,在這些環境中可以聽到可能會嚇到老鼠的突然響亮的噪音。在部分實驗室中,環境噪聲水平(未激活白噪聲發生器)約為 60 dB。在進行 TST 的位置激活白噪聲發生器的總聲級為 70-72 dB。但需要注意的是,這些數字僅作為示例提供,每個實驗室應根據其獨特的環境和情況選擇合適的噪音水平。


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          清潔用品



          每次測試結束后,使用消毒溶液,徹底擦拭懸掛盒。


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          亞克力透明套管(可選)



          為了有效防止小鼠在測試過程中長時間攀爬,可以使用亞克力套管套在小鼠尾巴上,再進行懸掛,具體方法可以參考以下視頻,效果棒棒噠!






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          實驗步驟



          1、調節好相機,盡可能靠近動物,獲得較高清晰度的視頻

          2、開啟白噪聲發生器,掩蓋外部噪聲。避免高音量,并確保所有動物使用相同級別的白噪聲。

          3、將待測小鼠帶入測試房間適應,通常至少一小時。請注意,放置在同一個房間的其他動物可以感知嗅覺和超聲波信號。

          4、將膠帶粘在老鼠的尾巴上。使用膠帶的標記端并確保膠帶粘在尾部并重新貼在自身上。膠帶應貼在尾巴的最末端,在膠帶外留下 2-3mm的尾巴。

          5、以最短的時間,將膠帶或者老鼠尾巴固定到懸尾箱頂部的掛鉤上,因為過長時間的拖延會對小鼠有壓力。

          6、使用VisuTrack軟件預先設置好的參數,實驗采集分析6分鐘。

          7、將小鼠送回它們的飼養籠后,從收集盤中丟棄糞便和尿液,并用消毒溶液擦拭裝置。




          VisuTrack軟件分析小鼠懸尾實驗



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          實驗“謎團"



          1、小鼠懸尾實驗測試時長通常為6分鐘,與強迫游泳實驗不同,小鼠在懸尾實驗早期更容易表現出不動狀態。

          2、測試中,只有小鼠的前肢活動,但后肢未動的情況,一律視為動物搖擺不動行為(絕望狀態)。

          3、由于運動慣性,小鼠的類似“鐘擺"活動也需要一律視為動物搖擺不動行為(絕望狀態)。

          4、懸尾實驗較強迫游泳實驗,沒有因浸入水中而導致體溫過低的風險,這2個實驗在靈敏度和性能存在各種重要差異,并且一項測試的結果不一定會在另一項測試中復制。

          實驗差異,可參考這2篇文獻:

          • Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.

          • O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.

          5、TST 不建議使用體重較大的大鼠,因為這些動物僅靠尾巴支撐體重可能會很痛苦。同樣,對于異常重的小鼠(例如用于模擬肥胖的小鼠)應謹慎,在這些情況下,實驗者應尋找替代測試,例如強迫游泳測試。

          6、預先用曠場實驗測量小鼠的整體活動水平很有必要,可有效防止在懸尾實驗中產生虛假結論。

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